探索NGS实验室的“硬核”质量密码

在实体瘤检测中，最常遇到的是福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本。这类样本历经沧桑，核酸极易发生降解和交联，是出了名的“难啃的骨头”。

质量通关秘籍：提取与质控的双重保险

• 标准化脱交联：严格把控裂解温度与时间，最大程度修复核酸损伤，唤醒沉睡的基因信息。

• 多维质控（QC）：提取出的DNA不是直接进入下一步！我们需要用Qubit进行“精准称重”（浓度定量），用NanoDrop看它是否“纯洁”（纯度检测），还要通过电泳评估它的“健康状况”（片段完整度评估）。

• 【CAP/ISO15189要求】：每一批次提取必须带入阳性/阴性质控品，确保试剂、环境没有被污染。只有指标全部达标的DNA，才有资格拿到下一关的“通行证”。

提取的DNA片段长短不一，无法直接上机测序。我们需要给它们进行“修剪”并接上特定的“接头”，将其组装成标准的测序文库。

质量通关秘籍：精细到微升的操作

• 精准打断：无论是酶切还是超声机械打断，温度和时间的控制必须精确到秒。片段过大或过小，都会影响最终的测序质量。

• 防污染机制：文库构建在专属的区域进行，且所有操作必须使用带滤芯的枪头。防止气溶胶污染是我们刻在骨子里的DNA。

• 上机前体检：建好的文库还要再进行一次QC，检查文库片段大小分布是否呈完美的“单峰”，坚决把引物二聚体等“杂质”拒之门外。

• 【CAP/ISO15189要求】：每一批次建库必须带入阳性/阴性质控品，确保试剂、环境没有被污染。

在全外显子组（WES）或实体瘤靶向Panel检测中，我们不需要测所有的基因，而是要精准“钓取”目标区域。这时候，就需要用到带有标记的探针。

质量通关秘籍：温度与时间的完美博弈

• 温控即生命：杂交过程对温度极为敏感。我们的PCR仪均经过定期严格校准（符合ISO15189要求），确保杂交温度偏差在±0.5℃以内。温度偏高“钓”不到，偏低又会混入杂质。

• 严苛的洗脱：洗涤过程就如同大浪淘沙，操作人员需严格遵循SOP，将非特异性结合的DNA洗去，只留下最核心的目标基因序列。

• 捕获后定量：捕获后的文库依然需要进行浓度检测，确保有效上机数据量。

历经重重考验的文库，终于登上了测序仪的舞台，海量的ATCG密码即将被解读。

质量通关秘籍：数据指标的“火眼金睛”

• 上机浓度标准化：混合文库上机前，必须精确定量至特定的pM级别。浓度过高会导致数据重叠，过低则浪费测序仪产能。

• 实时数据监控：测序仪运行期间，实验人员会实时监控核心质量指标：

• 仪器维保：符合双认证体系的实验室，测序仪都有自己专属的“健康档案”，定期进行预防性维护和运行确认。

一台高端的仪器谁都可以买，但一套运转如精密钟表的质量体系才是检验所的真正护城河。

在我们的实验室里，质量不仅仅是实验后的一组数据，它贯穿于“人、机、料、法、环”的每一个细节：

• 人：每一位实验员都必须经过严格的上岗培训与定期能力评估（PT）。

• 机：全生命周期的仪器校准与维护体系。

• 料：每一批试剂入库前必须进行性能验证。

• 法：严格受控、不断迭代的SOP操作指南。

• 环：24小时温湿度监控系统与严格的单向气流PCR分区。

武汉康测科技有限公司成立于2016年，公司坐落武汉，先后获得国家高新技术企业、3551创业人才企业、3551长期创新人才企业、科技小巨人企业、瞪羚企业等认证。

康测科技致力于新一代组学技术的开发和在生物医学研究领域的应用。公司以绝对定量测序技术和自动化IP技术为核心，建立了涵盖基因组、表观基因组、转录组、表观转录组、免疫组和互作组在内的全面的组学服务体系。技术水平在植物、微生物、动物复杂组织的表观遗传研究领域处于行业领先地位，已完成项目数达10000+，拥有数十台高通量核酸提取、QC、IP、建库、pooling、二/三代测序等自动化生产平台。

下辖武汉康测医学检验有限公司，其依托高通量测序技术平台，全面开展实体瘤、血液肿瘤、遗传病及大健康领域的精准临床基因检测服务；以国内首个经国家知识产权局授权的SMP液态活检技术为核心，联合合作医院开展多癌种MRD科研项目，并提供本地化NGS实验室整体解决方案。实验室连续多年满分通过国家卫健委临检中心、美国病理学会等机构组织的室间质评，检验能力获得美国病理学会（CAP）、美国实验室认可协会（A2LA）的ISO 15189双重国际认证。